血红蛋白的测定
日期:2014-05-27 09:55:45  浏览量:1427

课次

第 6

班级

 

人数

 

任课教师

 

课题

血红蛋白的测定

课的

任务

掌握血红蛋白测试的几种不同方法,掌握血红蛋白在运动实践中的应用

重点难点

重点掌握半自动生化分析仪和722分光光度计测试血红蛋白的方法,难点是末稍血的采集和比色分析法原理的理解和掌握。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

复习回顾(20分钟

1.血红蛋白基础知识的回顾

血红蛋白(Hb)是一种结合色蛋白,色素部分是亚铁血红素,蛋白质部分是珠蛋白。1分子的Hb是由4分子的亚铁血红素和1分子的珠蛋白结合而成的。Hb的主要生理功能是:1、运输氧气(O2)和二氧化碳(CO2),2、缓冲作用。每分子的Hb可结合4分子的氧气,在标准的情况下(0℃,1个大气压),每克Hb能结合1.39毫升氧气。HbO2比Hb具有较强的酸性,例如,在红细胞中,1毫摩尔的HbO2能产生1.88毫克当量的氢离子(H+),而1毫摩尔的Hb只能产生1.28毫克当量的H+。因此,在组织中,每放出1毫摩尔O2(体积22.4毫升),就能多结合0.60毫克当量的。因而Hb在调解体内酸碱平衡也有一定的作用。所以,在运动训练和比赛中,Hb不仅能为组织提供氧气,促进物质的有氧代谢和带走CO2,而且也能起中和酸性的作用。

Hb的含量对运动员的运动能力影响很大,对耐力运动员的专项素质尤为重要,因此,定期测定Hb的含量有助于了解运动员的营养、对负荷的适应及身体机能水平等情况。

2.分光光度法的测定原理

有色溶液对光线有选择性的吸收作用,不同物质由于其分子结构不同,对不同波长的光线的吸收能力也不同,因此,每种物质都具有其特异的吸收光谱。有些无色溶液,虽对可见光无吸收作用,但所含物质可以吸收特定波长的紫外线或红外线。

分光光度法鉴定物质性质及含量的技术,其理论依据是主要是指利用Lambert和Beer定律。

朗伯-比尔定律:当一束平行单色光垂直通过某溶液时,溶液的吸光度A与吸光物质的浓度c及液层厚度b成正比 :  A= εcb

ε——摩尔吸光系数。它表示物质的浓度为1mol/L,液层厚度为1cm时,溶液的吸光度。其单位为L/mol·cm
 b——液层光程(cm),常使用1.0cm 的比色皿,b=1cm
 C——样品浓度(mol/L)

 

 

血红蛋白的测定

一、实验目的(5分钟)

1.熟悉末梢采血的方法;

2.学习722分光光度计的使用;

3.理解分光光度法的测定原理;

4.掌握半自动生化分析仪测定血红蛋白含量的具体操作方法

5.掌握血红蛋白指标测定的意义及在体育运动中的应用。

二、实验材料(5分钟)

1. 器材:722分光光度计、10毫升    试管、5 ml移液管、一次性采血针、毛细吸血管、酒精棉签、洗耳球等。

 2. 试剂:氰化高铁血红蛋白稀释剂:称取高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]200mg,氰化钾50mg、碳酸氢钠(NaHCO3  AR)140mg(或磷酸二氢钾—KH2PO4)20mg,用蒸馏水溶解并稀释到1000ml。此试剂呈现透明、蛋黄色,pH7.0—7.4之间。配好后储存于棕色瓶内,紧塞瓶口后保存于冷暗处或冰箱(4℃)保存,可保存数月。

3.对象:体育系学生

三、实验步骤(50分钟)

(一)半自动生化分析仪测定血红蛋白含量步骤

1.在试管中准确加入HiCN稀释试剂5.0ml,做测定管。

2.用血红蛋白吸管准确吸取全血20µl,擦去管端血迹,放进装有HiCN试剂的试管底部,徐徐放出血样,并用上清液吸洗3次,摇匀。

3.放置至少10分钟后,用半自动生化分析仪以540nm波长进行比色, 以蒸馏水或HiCN稀释试剂为空白管,校正光密度到0点,读取测定管光密度乘以36.8,即为血红蛋白的含量(g%)。

计算公式:

血红蛋白浓度(g/100ml)=3.jpg

(二)722分光光度计测定血红蛋白含量步骤

1. 打开电源,预热10min
2.
依次将待测样品放入暗合,盖好暗合盖。
3.选定波长:调节波长选择钮至所需数值。
4.调0:调节暗电流旋钮,使电流计指针至透光率0。
5.调100%:将空白液置于被测位置,调节光量调节旋钮,使电流计指针至透光率100,此时的光密度为0。
6.移动定位拉杆,分别测量样品,记录光密度值。
7.旋钮移至原位,关闭电源,清洗比色杯,倒置于比色杯架上晾干。

四、实验结果评定(5分钟)

 根据测试值判定机体机能状态,联系Hb在运动实践中的应用进行分析。

 

通过本节课的学习,每位同学要熟悉末梢采血的方法;要学会半自动生化分析仪和722分光光度计的使用;要理解分光光度法的测定原理;要掌握血红蛋白指标测定的意义及在体育运动中的应用。

 

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