课次

第 6次

班级

人数

任课教师

课题

血红蛋白的测定

课的

任务

掌握血红蛋白测试的几种不同方法，掌握血红蛋白在运动实践中的应用

重点难点

重点掌握半自动生化分析仪和722分光光度计测试血红蛋白的方法，难点是末稍血的采集和比色分析法原理的理解和掌握。

教

学

内

容

及

组

织

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法

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复习回顾（20分钟）

1.血红蛋白基础知识的回顾

血红蛋白（Hb）是一种结合色蛋白，色素部分是亚铁血红素，蛋白质部分是珠蛋白。1分子的Hb是由4分子的亚铁血红素和1分子的珠蛋白结合而成的。Hb的主要生理功能是：1、运输氧气（O2）和二氧化碳（CO2），2、缓冲作用。每分子的Hb可结合4分子的氧气，在标准的情况下（0℃，1个大气压），每克Hb能结合1.39毫升氧气。HbO2比Hb具有较强的酸性，例如，在红细胞中，1毫摩尔的HbO2能产生1.88毫克当量的氢离子（H+），而1毫摩尔的Hb只能产生1.28毫克当量的H+。因此，在组织中，每放出1毫摩尔O2（体积22.4毫升），就能多结合0.60毫克当量的。因而Hb在调解体内酸碱平衡也有一定的作用。所以，在运动训练和比赛中，Hb不仅能为组织提供氧气，促进物质的有氧代谢和带走CO2，而且也能起中和酸性的作用。

Hb的含量对运动员的运动能力影响很大，对耐力运动员的专项素质尤为重要，因此，定期测定Hb的含量有助于了解运动员的营养、对负荷的适应及身体机能水平等情况。

2.分光光度法的测定原理

有色溶液对光线有选择性的吸收作用，不同物质由于其分子结构不同，对不同波长的光线的吸收能力也不同，因此，每种物质都具有其特异的吸收光谱。有些无色溶液，虽对可见光无吸收作用，但所含物质可以吸收特定波长的紫外线或红外线。

分光光度法鉴定物质性质及含量的技术，其理论依据是主要是指利用Lambert和Beer定律。

朗伯－比尔定律：当一束平行单色光垂直通过某溶液时，溶液的吸光度A与吸光物质的浓度c及液层厚度b成正比 :  A= εcb

ε——摩尔吸光系数。它表示物质的浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时，溶液的吸光度。其单位为L/mol·cm
 b——液层光程（cm），常使用1.0cm 的比色皿，b=1cm。
 C——样品浓度（mol/L）

血红蛋白的测定

一、实验目的（5分钟）

1.熟悉末梢采血的方法；

2.学习722分光光度计的使用；

3.理解分光光度法的测定原理；

4.掌握半自动生化分析仪测定血红蛋白含量的具体操作方法

5.掌握血红蛋白指标测定的意义及在体育运动中的应用。

二、实验材料（5分钟）

1. 器材：722分光光度计、10毫升    试管、5 ml移液管、一次性采血针、毛细吸血管、酒精棉签、洗耳球等。

 2. 试剂：氰化高铁血红蛋白稀释剂：称取高铁氰化钾[K3Fe（CN）6]200mg，氰化钾50mg、碳酸氢钠（NaHCO3  AR）140mg（或磷酸二氢钾—KH2PO4）20mg，用蒸馏水溶解并稀释到1000ml。此试剂呈现透明、蛋黄色，pH7.0—7.4之间。配好后储存于棕色瓶内，紧塞瓶口后保存于冷暗处或冰箱（4℃）保存，可保存数月。

3.对象：体育系学生

三、实验步骤（50分钟）

（一）半自动生化分析仪测定血红蛋白含量步骤

1.在试管中准确加入HiCN稀释试剂5.0ml，做测定管。

2.用血红蛋白吸管准确吸取全血20µl，擦去管端血迹，放进装有HiCN试剂的试管底部，徐徐放出血样，并用上清液吸洗3次，摇匀。

3.放置至少10分钟后，用半自动生化分析仪以540nm波长进行比色， 以蒸馏水或HiCN稀释试剂为空白管，校正光密度到0点，读取测定管光密度乘以36.8，即为血红蛋白的含量（g%）。

计算公式：

血红蛋白浓度（g/100ml）=

（二）722分光光度计测定血红蛋白含量步骤

1. 打开电源，预热10min
2. 依次将待测样品放入暗合，盖好暗合盖。
3.选定波长：调节波长选择钮至所需数值。
4.调0：调节暗电流旋钮，使电流计指针至透光率0。
5.调100%：将空白液置于被测位置，调节光量调节旋钮，使电流计指针至透光率100，此时的光密度为0。
6.移动定位拉杆，分别测量样品，记录光密度值。
7.旋钮移至原位，关闭电源，清洗比色杯，倒置于比色杯架上晾干。

四、实验结果评定（5分钟）

 根据测试值判定机体机能状态，联系Hb在运动实践中的应用进行分析。

本

课

小

结

通过本节课的学习，每位同学要熟悉末梢采血的方法；要学会半自动生化分析仪和722分光光度计的使用；要理解分光光度法的测定原理；要掌握血红蛋白指标测定的意义及在体育运动中的应用。