A..血红蛋白的定量测定

【目的】掌握用比色法来测定血红蛋白量。（3分）

【原理】血红蛋白量测定方法有光电比色法、分光光度法和沙里氏比色计比色法。本实验采用沙里氏比色法。血液中血红蛋白的颜色随其结合的氧量多少而有一定的变化。为提高测定的标准，可向血液中加稀盐酸，使亚铁血红蛋白酸化成高铁血红蛋白而显稳定的棕黄色，加蒸馏水稀释并与标准色比较，既可求出100mL血液中所含的血红蛋白的克数。血红蛋白的含量受年龄、性别、营养状况、体育锻炼以及居住条件的影响。（5分）

我国正常成年男子约含12～15g·dL^-1；女子约为11～14 g·dL^-1。

【器材】沙里氏比色计（含比色管、比色架、吸血管）、采血针、75℅酒精、棉球、95℅酒精、0.1mol盐酸、乙醚、蒸馏水、小玻棒、小滴管。（6分）

【步骤】

1.向比色管内加入0.1mol盐酸10滴（约达到比色管的10℅的刻度线）。（3分）

2. 采血。以75℅的酒精消毒无名指及采血针（2分）；

3．用采血针刺破无名指指腹一侧皮肤，让血液自然流出，用消毒干棉球擦去一滴后，用右手平持吸血管使管口接触自然流出的一滴血管，准备吸取20μl的血液（血柱液面平20μl刻度线）。（6分）

4．用干棉球拭檫管外的血液，然后迅速将吸血管移入比色管，徐徐将血液吹入盐酸深层，并用上层清夜多次洗涤吸血管，轻轻振荡，置室温中10～15min,充分到使亚铁血红蛋白变成高铁血红蛋白。（6分）

5.比色。将比色管放入血红蛋白比色架中，向比色管逐滴加入蒸馏水并且边滴边搅拌边竖起对光观察，将比色管的颜色与比色计上的标准颜色做比较，直至比色管溶液颜色与标准颜色一致为止。正确读出并记录比色管内溶液弯月面下缘最底点对应的比色管刻度数值，此数值即为每100mL血液中所含血红蛋白的克数。（9分）

【注意事项】

1.要准确配制0.1mol的盐酸。血液被酸化的时间不得少于10min。

2.吸取的血量应准确，并将吸血管外的血液抹去。

3.吹入血液和洗净吸血管时，切勿将空气吹入盐酸中，以免形成气泡影响比色。

4.稀释时要耐心地逐滴加蒸馏水，并应边滴边搅边竖起比色，当颜色接近时，只能半滴半滴地稀释。